Un Fluorómetro es un equipo que permite el análisis, la identificación y la cuantificación de sustancias químicas con moléculas susceptibles de presentar fluorescencia, mediante la técnica de espectrofotometría por fluorescencia o fluorometría.
Podemos decir que un Fluorómetro es un tipo especial de dispositivo óptico usado habitualmente en entornos de laboratorio, que es capaz de medir la calidad fluorescente de muestras biológicas o minerales. La fluorescencia se produce cuando una sustancia emite luz visible y aparece a brillar después de que ha sido expuesto a algún tipo de radiación, ya sea sola o radiación de alta energía tal como de rayos X de la luz visible. Esta propiedad es similar a la fosforescencia, que es una emisión de luz de baja temperatura de una acumulación de energía o la radiación de una sustancia.
El diseño de cualquier fluorómetro típico tiene varios componentes clave. Tiene una fuente de entrada para la luz visible ordinaria, y esta luz pasa a través de un filtro de excitación que permite que sólo las longitudes de onda específicas de a impactos en que se estudió una celda de muestra del material. Cuando este material, ya sea orgánico o inorgánico, es bombardeado por estas longitudes de onda controladas de luz, que emite fluorescencia, emitiendo luz característica de su propia que se pasa luego a través de un filtro de emisión. Las emisiones son leídas por un detector de luz que produce una lectura para el observador para saber cómo está reaccionando la muestra y lo que su contenido es.
Aunque la detección fluorómetro se basa en los principios universales fundamentales de fluorescencia, hay varias aplicaciones únicas y adaptaciones para los dispositivos. Uno de los usos principales de los fluorómetros es que se utilizan para medir la fluorescencia de la clorofila y así investigar la fisiología de las plantas, aunque actualmente pueden tener muchas aplicaciones.
¿Qué es la fluorescencia?
La fluorescencia es un término que fue utilizado por primera vez enel año 1852 por George Gabriel Stokes. Es un tipo particular de luminiscencia que caracteriza a las sustancias que son capaces de absorber energía en forma de radiaciones electromagnéticas y luego emitir parte de esa energía en forma de radiación electromagnética de longitud de onda diferente.
El mecanismo de fluorescencia típico implica tres pasos secuenciales, llamados respectivamente absorción (1), disipación no radiativa (2) y emisión (3). El fenómeno de fluorescencia posee numerosas aplicaciones prácticas, entre las que se encuentran por ejemplo análisis en mineralogía, gemología, sensores químicos (espectroscopia fluorescente), pigmentos y tintas, detectores biológicos y lámparas fluorescentes.
¿En que se basa la espectrometría de fluorescencia?
La espectrometría de fluorescencia (también llamada fluorometría o espectrofluorimetría) es un tipo de espectroscopia electromagnética que analiza la fluorescencia de una muestra. Se trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz ultravioleta, que excita los electrones de las moléculas de ciertos compuestos y provoca que emitan luz de una menor energía, generalmente luz visible (aunque no necesariamente). Una técnica complementaria es la espectrometría de absorción. Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluorómetros o fluorímetros. La espectrometría de fluorescencia se utiliza en análisis bioquímicos, médicos, químicos y de investigación de compuestos orgánicos.
¿Cuál es la aplicación más reciente de la fluorómetros?
Actualmente, una de las aplicaciones más modernas de la fluorometría es la cuantificación de ácidos nucleicos, a través de los fluorometros, quienes miden concentraciones de ADN, ARN, y proteínas con una alta precisión y sensibilidad. Se basa en la utilización de fluoróforos que se intercalan específicamente entre las moléculas de interés, minimizando así los efectos de los contaminantes. La precisión de las mediciones incluso a bajas concentraciones (Rango de efectividad de 5 ng a 1 ug) lo que hace de estos equipos una herramienta ideal para aplicaciones tales como PCR en tiempo real y secuenciación masiva.
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