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Utilisation de l’électrophorèse horizontale pour détecter le myélome multiple

La classification et le diagnostic différentiel de la myopathie gamma monoclonale sont basés sur des normes cliniques, biologiques et radiologiques, mais dans certains cas, c’est encore difficile. Le myélome multiple (MM) est la mastopathie maligne gamma la plus commune avec un large répertoire de signes et de symptômes. Au cours des 10 dernières années, les options de traitement pour les patients atteints de MM se sont considérablement élargies. Associées à l’amélioration des soins de soutien, ces nouvelles thérapies prolongent considérablement la survie des patients jeunes et âgés. Dans tous les cas, s’il y a suspicion de myélome multiple, plusieurs procédures assurent le diagnostic ; les examens les plus importants comprennent :

  • Analyses de sang et d’urine. Ils sont examinés afin de détecter la présence d’une protéine spécifique (paraprotéine) produite par les plasmocytes en croissance maligne.
  • Procédures d’imagerie diagnostique comme la tomodensitométrie (CT) et l’IRM.
  • Examen d’échantillons de moelle osseuse de la crête iliaque (biopsie tumorale).

Quel est l’un des tests les plus importants pour détecter le myélome multiple ?

Afin d’élucider le diagnostic du myélome multiple, les valeurs biologiques du sang et de l’urine sont déterminées. La détermination de ces valeurs est également nécessaire pendant le cours de la maladie pour contrôler son évolution. Outre la détermination du nombre de globules rouges, de globules blancs et de plaquettes et diverses analyses d’urine, l’électrophorèse des protéines joue un rôle fondamental.

L’électrophorèse des protéines est une technique de médecine de laboratoire qui consiste à séparer les protéines provenant d’un échantillon, dans ce cas du sang, afin que le médecin puisse voir dans quelle quantité se trouvent les différentes protéines dans cet échantillon. Cet examen est très important car il permet de déterminer la quantité de paraprotéine (protéine M). On appelle aussi cela déterminer le gradient M. Avec cette analyse, on peut établir deux choses :

  • Niveau de paraprotéine (protéine M): une quantité excessive de paraprotéine (également appelée protéine paraprotéine 2M) est produite dans le myélome multiple. L’électrophorèse des protéines peut être utilisée pour déterminer la quantité de sérum2M présente dans le sang.
  • Détection des chaînes légères libres dans le sérum : Ce test est important pour diagnostiquer un type spécifique de myélome multiple dans lequel aucune paraprotéine ne peut être détectée.

En quoi consiste l’électrophorèse des protéines du sang ?

L’électrophorèse des protéines est une technique de médecine de laboratoire dans laquelle les protéines sanguines sont séparées afin que le médecin puisse voir dans quelle quantité les protéines individuelles se trouvent dans le sang. Le principe fonctionne de la même manière que la décomposition d’une tache de couleur dans ses couleurs individuelles dans une séparation par chromatographie : si vous appliquez une tache de couleur sur un papier filtre et que vous gouttez un solvant dessus, les particules de couleur individuelles migrent vers l’extérieur dans une mesure différente selon leur taille, leur poids et l’interaction avec le papier et le solvant.

Lors de l’électrophorèse, le sérum sanguin est appliqué sur un milieu de circulation, par exemple un filtre, un film ou un gel. Ensuite, à l’aide d’électrodes, une différence de potentiel est appliquée le long du milieu de fonctionnement. En fonction de leur taille, de leur poids et de leur charge électrique, les particules de protéines voyagent le long du milieu en mouvement à des degrés divers. Cela crée un modèle très typique. Ce modèle est converti par ordinateur, de sorte que le médecin reçoit un diagramme de courbe claire, dans lequel on voit généralement cinq courbes, qui correspondent aux cinq protéines prédominantes dans le sang :

  • L’albumine est une protéine présente dans le sang qui peut transporter diverses substances, telles que des hormones ou des graisses, à travers le sang. La protéine sanguine totale se compose d’environ 60 pour cent d’albumine.
  • Les globulines alpha-1, alpha-2 et bêta sont des protéines qui transportent une variété de substances dans le sang, par exemple des graisses ou des vitamines.
  • Les immunoglobulines, qui sont principalement des gammaglobulines. Les immunoglobulines (appelées « anticorps ») sont des protéines qui luttent contre les agents pathogènes.

D’autres protéines peuvent également apparaître qui sont à la base du diagnostic du MM et du stade de la maladie. En fonction du stade, le médecin peut estimer le degré de progression de la maladie. Le traitement et le pronostic en dépendent. La maladie est divisée en stades I à III. La classification est basée sur la quantité de deux types de protéines dans le sang. Il s’agit de l’albumine et de l’albumine, dont les concentrations sont déterminées par analyse sanguine. Plus la concentration sanguine de bosentan2M est élevée, plus le stade du myélome multiple est avancé.

Pourquoi choisir un équipement d’électrophorèse horizontale de Kalstein ?

Comme décrit dans cet article, la détermination d’un certain groupe de protéines dans le sang est critique pour le diagnostic du MM, son stade et son traitement. Pour cette raison, il est essentiel de disposer d’une équipe d’électrophorèse horizontale du fabricant Kalstein dans un laboratoire de bioanalyse. Avec cet équipement, vous pouvez contrôler la température de séparation, a une tige qui vous permet d’ajuster la longueur en fonction de la course des analytes et est livré avec des électrodes déployées qui facilitent son utilisation. Pour plus de détails techniques, prix, achat et devis, vous pouvez consulter les page ICI

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Quels sont les avantages de l’électrophorèse dans les aliments ?

Pour établir l’identité des espèces végétales ou animales à des fins alimentaires, en se basant uniquement sur l’observation de caractères externes tels que la taille, la forme et l’apparence, c’est une tâche difficile et peu fiable. Ce problème est également fréquent lorsque vous essayez d’identifier des souches de bactéries probiotiques, où les différences dans les traits phénotypiques ne conduisent pas à des résultats fiables, car les conditions de culture de ces micro-organismes, peuvent les modifier.

L’ensemble des outils fournis par la génétique moléculaire permet d’identifier les organismes et leurs produits par rapport à leur propre code génétique (ADN, ARN), plutôt que par l’étiquette, en utilisant des techniques de génotypage basées principalement sur l’amplification de l’ADN par réaction en chaîne de polymérase (PCR) et le profil électrophorétique. Les différences intraspécifiques peuvent être détectées par des réactions de conjugaison utilisant des enzymes de restriction (PCR-RFLP). Les avantages inhérents à ces techniques sont :

  • Rapidité de la procédure.
  • Reproductibilité élevée.
  • Haute fiabilité.
  • La mise en œuvre est relativement économique.
  • Prise en charge de l’application des protocoles de contrôle de la qualité d’étiquetage des produits.

Dans le cas de l’étude des micro-organismes utilisés dans l’industrie alimentaire, la réponse de PCR est adaptée aux différences entre séquences répétées du génome bactérien (Eric-PCR et représentants de PCR) au niveau du genre, de l’espèce et même des souches, selon le modèle électrophorétique du produit d’amplification. Il peut être vu comme l’électrophorèse, étant un outil pour séparer les macromolécules en fonction de leur taille, il apporte des informations précieuses tout au long de ce processus.

Applications dans l’étude des organismes génétiquement modifiés (OGM)

L’idée principale derrière l’utilisation du génie génétique pour soutenir les agriculteurs et les obtenteurs était principalement de réduire les coûts et de maximiser les profits. D’une part, les produits agricoles et les produits phytogénétiques bénéficient d’augmentations de rendement et de qualité grâce à l’utilisation d’OGM ; d’autre part, l’optimisation des ingrédients peut être ciblée ou peut être envisagée comme une augmentation de croissance qualitative, quantitative ou accélérée.

Si nécessaire, ces avantages peuvent également être réalisés à l’aide de la formation de résistance et de tolérance aux parasites, au stress, aux champignons, aux virus, à la chaleur, au froid, au sel, aux maladies, entre autres. Bien que les avantages découlant de l’utilisation de la biotechnologie pour l’amélioration de la production alimentaire, certaines législations restreignent l’utilisation de ces technologies, il est donc courant, dans le cadre du contrôle de la qualité de ces produits, d’exiger la certification de leur teneur en OGM.

Utilisation des techniques de la biologie moléculaire dans le contrôle de la qualité des produits de la mer

Afin d’éviter d’éventuelles fraudes dans l’étiquetage des produits de la mer, l’identification des espèces de poissons devient un sujet de préoccupation croissant. L’authentification de ces produits alimentaires devient un problème insoluble lorsque les caractéristiques morphologiques externes du poisson sont éliminées lors du filetage ou de la transformation. Les études applicables à ces échantillons sont compliquées par :

  • Incorporation d’additifs.
  • Procédés technologiques appliqués aux denrées alimentaires.
  • Type et durée de stockage de l’échantillon.

L’identification des poissons est possible en utilisant des tests biochimiques qui déterminent la composition des protéines solubles dans l’eau, comme l’approche isoélectrique (IEF) qui révèle le polymorphisme des protéines qui, à son tour, peut être utilisé pour l’identification sans équivoque des espèces. Toutefois, l’utilisation d’analyses électrophorétiques de protéines obtenues à partir de thon en conserve n’est pas appropriée pour l’identification d’espèces, car le processus de mise en conserve implique un traitement thermique qui modifie irréversiblement la solubilité dans l’eau des protéines.

En conséquence, des techniques d’analyse de l’acide désoxyribonucléique (ADN) ont été utilisées à cet égard au cours des dernières années. Ces techniques sont basées sur l’analyse polymorphique de différents marqueurs génétiques amplifiés par la technique de réaction en chaîne par polymérase (PCR). Bien que l’analyse de l’ADN soit plus complexe que l’analyse des protéines, il est possible d’obtenir plus d’informations avec la première. En outre, la molécule d’ADN semble être beaucoup plus stable au traitement thermique que les protéines elles-mêmes.

Les équipes d’électrophorèse pour soutenir la science des aliments

Le fabricant d’instruments de laboratoire Kalstein met à la disposition des chercheurs en sciences des aliments des équipements pour électrophorèse qui servent de support aux phases de développement, d’évaluation et de contrôle des organismes et de leurs produits. Ces équipements se caractérisent par leur fiabilité, leur contrôle précis des variables critiques telles que le pH (en utilisant suffisamment de solution tampon) et la température, et leur mise en service est simple. Pour obtenir des informations sur les prix, les devis et les achats, consultez les page ICI

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Qu’est-ce que l’électrophorèse bidimensionnelle ?

L’électrophorèse bidimensionnelle est un type spécial d’électrophorèse, considérée comme une technique à haute résolution qui permet la séparation de mélanges de protéines complexes, grâce à sa bidimensionnalité, une caractéristique distinctive qui offre son pouvoir de résolution.

Dans cette technique, les protéines sont séparées séquentiellement par deux critères physiques. Dans un premier temps, les protéines sont séparées sur un gel à gradient de pH dans un environnement dénaturant en fonction de leur point isoélectrique (focalisation isoélectrique). Après cette séparation de charges, les protéines sont séparées selon leur masse moléculaire ou leur taille par électrophorèse discontinue sur gel de polyacrylamide en présence de SDS (SDS-PAGE).

L’électrophorèse bidimensionnelle (IEF + SDS-PAGE) est la technique la plus utilisée pour l’analyse globale et la séparation des composants du protéome (ensemble de protéines exprimées à partir d’un génome à un instant donné).

Focalisation isoélectrique (IEF)

La focalisation isoélectrique est un type d’électrophorèse utilisé pour séparer les molécules chargées. Il est basé sur le fait qu’une protéine a des groupes chargés des deux polarités, elle a donc un point isoélectrique (pI) qui correspond à la valeur du pH auquel la molécule a une charge nette (z) égale à zéro (zwitterion), et il est donc immobile dans un champ électrique. En appliquant la différence de potentiel, les protéines trouvées dans les régions de pH inférieur à leur point isoélectrique seront chargées positivement, et migreront vers la cathode ; tandis que ceux qui se trouvent dans des régions de pH supérieur à leur point isoélectrique auront une charge négative et migreront vers l’anode.

Électrophorèse SDS-PAGE

Dans ce type d’électrophorèse, on utilise du dodécyl sulfate de sodium (SDS), qui est un détergent largement utilisé dans les préparations biochimiques car il se lie fermement aux protéines et leur fait adopter une structure désordonnée afin d’obtenir une dénaturation efficace. Cette technique permet la séparation des protéines dans l’ordre de leurs masses moléculaires par des effets de filtration sur gels.

Étapes de l’électrophorèse bidimensionnelle

  • Préparation des échantillons : Des agents chaotropes, des tensioactifs et des agents réducteurs sont utilisés ici. Les agents chaotropes, tels que l’urée, provoquent la dénaturation des protéines en rompant les liaisons hydrogène, exposant les résidus hydrophobes qui sont solubilisés par les agents tensioactifs. Les agents réducteurs, tels que le DTT (dithiothréitol, bien que d’autres réducteurs non chargés alternatifs soient également utilisés), complètent la dénaturation des protéines en brisant les ponts disulfures.
  • Séparation dans la 1ère dimension (focalisation isoélectrique) : Le mélange de protéines est séparé selon ses points isoélectriques.
  • Séparation dans la 2e dimension (SDS-PAGE) ; Les protéines sont séparées en fonction de leur poids moléculaire.
  • Révélé; Les méthodes les plus couramment utilisées sont la coloration au bleu de Coomassie qui se lie aux protéines mais pas au gel, la coloration fluorescente Sypro Ruby et la coloration à l’argent. La coloration au bleu de Coomassie classique peut généralement détecter des bandes de protéines de 50 ng, tandis que la coloration à l’argent augmente cette limite de sensibilité d’environ 50 fois.

Applications de l’électrophorèse bidimensionnelle

La principale application de l’électrophorèse bidimensionnelle est la protéomique d’expression ; Avec cette technique, l’expression protéique de deux échantillons peut être comparée qualitativement et quantitativement. Il a été largement utilisé dans la préparation de cartes de référence, c’est-à-dire dans la dissection de la composition protéique d’un certain organite cellulaire. Ces cartes sont utilisées pour comparer diverses expériences, telles que des traitements avec des médicaments ou des composés toxiques, des tissus sains ou malades, des conditions de culture, des lignées cellulaires normales et tumorales, c’est là que l’électrophorèse bidimensionnelle acquiert sa fonctionnalité maximale.

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Systèmes d’électrophorèse et de documentation sur gel

L’électrophorèse sur gel est une technique largement utilisée dans les laboratoires des sciences de la vie pour séparer les macromolécules telles que l’ADN, l’ARN et les protéines. Dans cette technique, les molécules sont séparées en fonction de leur taille et de leur charge électrique.

Comment fonctionne l’électrophorèse ?

Le gel utilisé en électrophorèse sur gel est généralement fabriqué à partir d’un matériau appelé agarose, qui est une substance gélatineuse extraite d’algues. Ce gel poreux pourrait être utilisé pour séparer des macromolécules de nombreuses tailles différentes. Le gel est immergé dans une solution tampon du sel dans une chambre d’électrophorèse. Le tris-borate-EDTA (TBE) est couramment utilisé comme tampon. Sa fonction principale est de contrôler le pH du système. La chambre a deux électrodes – une positive et une négative – à ses deux extrémités.

Les échantillons à analyser sont ensuite chargés dans de minuscules puits sur le gel à l’aide d’une pipette. Une fois la charge prête, un courant électrique de 50-150 V est appliqué. Maintenant, les molécules chargées présentes dans l’échantillon commencent à migrer à travers le gel vers les électrodes.

La vitesse à laquelle chaque molécule se déplace à travers le gel s’appelle sa mobilité électrophorétique et est principalement déterminée par sa charge nette et sa taille. Les molécules fortement chargées se déplacent plus rapidement que les molécules faiblement chargées.

Une fois la séparation terminée, le gel est coloré avec un colorant pour révéler les bandes de la séparation. Le bromure d’éthidium est un colorant fluorescent couramment utilisé en électrophorèse sur gel. Le gel est trempé dans une solution diluée de bromure d’éthidium puis placé dans un transilluminateur ultraviolet pour visualiser les bandes de séparation. Les bandes sont immédiatement examinées ou photographiées pour référence future, car elles se diffuseront dans le gel au fil du temps.

Systèmes de documentation de gel

Il ne faut pas oublier que l’électrophorèse sur gel est l’un des principaux outils des laboratoires de biologie moléculaire, cellulaire et biochimique. En fait, il reste l’une des principales approbations et essais demandés lors de la publication de résultats importants. Pour cette raison, les chercheurs ont besoin de systèmes à haute résolution et de plusieurs systèmes de reconnaissance d’images pour traiter les gels. De ce point de vue, le traitement des gels nécessite la plus grande sensibilité pour assurer la qualité des résultats.

Actuellement, le développement numérique permet de disposer d’analyseurs d’images ou de systèmes de documentation sur gel, spécifiquement conçus pour s’adapter aux besoins et au budget du laboratoire. Ceux-ci fournissent des solutions innovantes pour la capture et l’analyse d’images, et sont configurés en fonction des techniques utilisées par chaque chercheur.

Chez Kalstein, nous vous présentons notre système de documentation de gel dont la conception compacte et conviviale vous permet de capturer facilement l’image du gel en haute qualité. Il s’agit de systèmes dotés d’une interface utilisateur intuitive, capables d’une capture d’image rapide et d’une exposition automatique, et équipés d’une caméra haute résolution exceptionnelle. Les images sont facilement enregistrées, grâce à son logiciel. Il dispose d’un excellent transilluminateur et d’un filtre LED bleu qui permet de récupérer les acides nucléiques directement à partir du gel, sans les endommager, contrairement aux anciens systèmes. Par conséquent, nous vous invitons à consulter HERE

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Qu’est-ce que l’électrophorèse ?

L’électrophorèse est une méthode analytique dans laquelle un courant électrique contrôlé est utilisé afin de séparer les biomolécules en fonction de leur rapport taille/charge électrique, en utilisant une matrice gélatineuse comme base. Cette technique a une variété d’utilisations pratiques, telles que la médecine légale pour l’identification humaine, le projet du génome humain, la recherche sur les protéines et les mutations génétiques et les tests de diagnostic clinique.

Quel matériel est utilisé dans cette technique ?

L’électrophorèse est réalisée avec un équipement composé d’une charge négative à une extrémité et d’une charge positive à l’autre, appelé système d’électrophorèse. Lors de l’insertion de molécules chargées, dans cet environnement, les négatives iront à un extrême et les positives à l’autre correspondant. Par exemple, lors de l’analyse de protéines sur gel, dans ces kits, la protéine entière est prélevée pour analyser sa taille. De cette façon, les plus courtes migreront plus rapidement vers les pôles et se refléteront dans la partie inférieure du gel. Au lieu de cela, le plus long sera au sommet.

Comment ça marche?

Lorsqu’un mélange de molécules ionisées et chargées net est positionné dans un champ électrique, ils subissent une force d’attraction vers le pôle qui a la charge opposée, permettant aux molécules chargées positivement de se déplacer vers la cathode (pôle négatif) pendant un certain temps chargée positivement se déplacera vers l’anode (pôle positif).

L’électrophorèse est une technique courante en laboratoire clinique. Il permet la séparation d’espèces chimiques (acides nucléiques ou protéines) le long d’un champ électrique en fonction de leur taille et de leur charge électrique.

Certains types d’électrophorèse

Electrophorèse sur papier filtre et acétate de cellulose : La technique d’électrophorèse avec papier filtre comme support est rarement utilisée, et son utilisation est limitée à la séparation des acides aminés. En revanche, l’électrophorèse sur acétate de cellulose ou cellogel présente un certain nombre d’avantages par rapport au papier filtre. Il permet la séparation des protéines, des migrations plus rapides et a une résolution plus élevée.

Électrophorèse sur gel d’agarose : Le gel d’agarose est un bon support électrophorétique. De plus, sa nature lui confère la particularité de pouvoir séparer des molécules en fonction de leur taille. Ce support permet de séparer les acides nucléiques en fonction de leur taille. Il est utilisé pour séparer les grosses molécules.

Électrophorèse sur gel de polyacrylamide : Le gel de polyacrylamide est considéré comme le meilleur support. Ils ont également une grande stabilité mécanique et sont insolubles dans l’eau. Parmi tant d’avantages, il y a un inconvénient qui en limite l’utilisation : il est neurotoxique. Il est utilisé pour la séparation des protéines et, comme le gel d’agarose, permet la séparation des molécules en fonction de leur taille.

L’électrophorèse capillaire : Cette technique diffère beaucoup des précédentes. Le support est différent, puisqu’il utilise des capillaires de silice fondue, recouverts d’une couche de polyimine. Les résultats sont visualisés sur un écran d’ordinateur.

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Comment fonctionne un appareil d’électrophorèse?

L’électrophorèse est une méthode analytique dans laquelle un courant électrique contrôlé est utilisé afin de séparer les biomolécules en fonction de leur rapport taille / charge électrique, en utilisant une matrice gélatineuse. Lorsqu’un mélange de molécules ionisées et chargées en réseau est placé dans un champ électrique, elles subissent une force attractive vers le pôle ayant une charge opposée, ce qui laisse un certain temps aux molécules chargées positivement pour se déplacer vers la cathode (pôle négatif) et celles-ci. chargé positivement se dirigera vers l’anode (pôle positif).

L’électrophorèse sur gel est utilisée dans les laboratoires pour classifier et mesurer les protéines ou les acides nucléiques. Après une préparation minutieuse, les échantillons sont chargés à une extrémité du gel, un courant électrique est appliqué et les échantillons sont acheminés à l’extrémité positive du plateau.

Quand cette technique a-t-elle commencé à être utilisée?

L’électrophorèse a débuté avec le travail d’Arne Tiselius en 1931 et de nouveaux procédés de séparation et techniques d’analyse chimique basés sur l’électrophorèse se sont développés au XXIe siècle. Tiselius, avec le soutien de la Rockefeller Foundation, a développé « l’appareil Tiselius » pour l’électrophorèse à limite de mouvement. La méthode s’est lentement étendue jusqu’à l’avènement des méthodes d’électrophorèse en zones efficaces dans les années 1940 et 1950, qui utilisaient du papier filtre ou des gels pour soutenir le support.

Dans les années 1960, les méthodes d’électrophorèse sur gel sont devenues de plus en plus sophistiquées, permettant de séparer des molécules biologiques sur la base de différences physiques et chimiques minimes, contribuant ainsi à l’essor de la biologie moléculaire. L’électrophorèse sur gel et les techniques associées sont devenues la base d’un large éventail de méthodes biochimiques, telles que les empreintes protéiques, l’hybridation Southern et les procédures de transfert similaires, le séquençage de l’ADN, etc.

Comment fonctionne l’équipement d’électrophorèse?

Un dispositif d’électrophorèse est un dispositif qui permet la séparation de mélanges de particules avec une charge électrique en solution, en tirant parti de la vitesse de migration différente lorsqu’un champ électrique est appliqué (électrophorèse). Il est également utilisé pour la séparation de l’ADN et des protéines. Avec 4 sorties, l’appareil dispose de 4 niveaux de mesure: de 0 à 500 mA, entre 0 et 400 V et de 0 à 1 mA entre 0 et 200 V.

L’électrophorèse sur gel d’agarose est une procédure utilisée dans plusieurs domaines de la biotechnologie, c’est une procédure d’analyse utilisée dans les laboratoires de recherche, biomédicaux et médico-légaux. Parmi les types d’électrophorèse existants, l’électrophorèse sur gel d’agarose est la méthode la plus courante et la plus utilisée.

C’est une méthode de séparation fréquemment utilisée pour analyser les fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction, la PCR. Il s’agit d’une méthode analytique commode pour déterminer sa taille dans une plage de 500 à 30 000 paires de bases. Il peut également être utilisé pour séparer d’autres biomolécules telles que les colorants, l’ARN et les protéines. Il existe différents types d’électrophorèse sur gel d’agarose, mais l’électrophorèse horizontale est la méthode la plus couramment utilisée pour séparer les molécules d’ADN dans l’agarose. D’autres types, tels que l’électrophorèse verticale, sont utilisés pour séparer les protéines et utiliser des gels de Polyacrylamide.

Une source de courant est connectée à l’appareil d’électrophorèse et un courant électrique est généré. Les molécules chargées de l’échantillon entreront dans le gel à travers la paroi du puits de semis. Les molécules avec une charge négative vont migrer vers l’électrode positive (anode) tandis que les molécules avec une charge positive vont migrer vers l’électrode négative (cathode).

Le tampon sert de conducteur électrique et contrôle le pH, ce qui est important pour la stabilité des molécules biologiques. Comme l’ADN a une charge négative à pH neutre, il migrera à travers le gel vers l’électrode positive pendant l’électrophorèse.

Quelles considérations devriez-vous considérer lors de l’application de cette technique?

Comme pour toute procédure scientifique, la possibilité d’erreur humaine et d’autres sources d’erreur existe et doit être prise en compte lors de l’interprétation des résultats. Prise en compte des éléments suivants: contamination de l’échantillon Problèmes dans le gel, chargement d’échantillons incorrects, problèmes de courant électrique et problèmes de visualisation.

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Erreurs courantes en électrophorèse

L’électrophorèse sur gel est utilisée dans les laboratoires pour classifier et mesurer les protéines ou les acides nucléiques. Après une préparation minutieuse, les échantillons sont chargés sur une extrémité du gel, un courant électrique est appliqué et les échantillons sont acheminés vers l’extrémité positive du plateau. Comme pour toute procédure scientifique, la possibilité d’erreur humaine et d’autres sources d’erreur existe et doit être prise en compte lors de l’interprétation des résultats.

1. Contamination de l’échantillon

Quoi que vous mesuriez, la première étape pour obtenir des résultats précis est un échantillon non contaminé. Prenez des mesures pour éviter toute contamination lors de la préparation en utilisant des gants, en utilisant uniquement des récipients stériles et en changeant la pointe de la pipette après chaque utilisation. Veillez également à ne pas contaminer votre pipette en prélevant l’échantillon et en le faisant monter sur la pipette.

2. Problèmes dans le gel

 

De nombreuses erreurs sont dues à des problèmes avec le gel. Premièrement, une concentration de gel incorrecte peut entraîner une accélération ou une impossibilité de fonctionnement du gel. Assurez-vous que vous utilisez une concentration bien mesurée et orientée vers les tailles générales de l’échantillon que vous essayez de mesurer. Par exemple, lorsque vous travaillez avec un échantillon d’ADN, un gel à 0,7% vous permettra de commander efficacement des fragments d’une longueur comprise entre 800 et 10 000 paires de bases, tandis que des fragments plus petits nécessiteraient un gel à plus fort pourcentage. haute

Le gel peut être compromis d’autres manières. Avant de charger les échantillons, assurez-vous que le gel ne présente pas de coupures ni de bulles. Même une petite imperfection peut affecter vos résultats. Une bonne préparation du gel est la clé. Suivez toutes les instructions, versez lentement pour éviter les bulles et laissez le gel refroidir complètement avant de charger les échantillons.

Enfin, lorsqu’un gel est établi, un peigne est placé pour créer les puits où les échantillons sont chargés. Veillez à ce que ce peigne soit correctement placé dans les boîtes du plateau, car un peigne qui crée des puits trop profonds ou peu profonds peut entraîner des erreurs.

3. Charge d’échantillons incorrects

Bien que cela semble assez simple, charger vos échantillons dans de petits puits dans le gel peut être difficile. Le plus important est de savoir combien vous allez mettre dans chaque puits. L’excédent de l’échantillon peut entraîner l’apparition de larges taches ou leur apparence plus petite qu’elles ne le sont réellement; À son tour, très peu de l’échantillon peut être impossible à voir. De même, ne percez pas le gel lors du chargement des échantillons car cela pourrait causer des problèmes, tout comme les autres imperfections du gel.

4. Problèmes de courant électrique

Une erreur courante pour les nouveaux étudiants en technique d’électrophorèse sur gel est de faire fonctionner le gel à l’envers. Cela se produit lorsque les connexions positives et négatives sont attachées aux mauvaises extrémités du bac. Cette erreur peut être évitée en gardant à l’esprit que l’échantillon sera toujours traité en rouge. Assurez-vous donc que l’extrémité positive est fixée sur le côté opposé du plateau des puits d’échantillon.

Il existe également des problèmes d’utilisation d’une tension incorrecte. Une tension trop élevée peut entraîner le passage de l’échantillon à l’autre extrémité du gel si rapidement qu’il tombe, alors qu’une tension trop basse peut signifier que le délai de traitement de l’échantillon est trop long ou qu’il ne court pas suffisamment pour pouvoir être quantifié à la fin .

5. Problèmes de visualisation

 

Si vous ne pouvez pas voir les résultats, il est évident que vous aurez du mal à les interpréter. Un échantillon trop petit peut être difficile à visualiser. Les problèmes de méthodes de visualisation peuvent également compromettre les résultats. Les méthodes les plus courantes utilisent des colorants visibles ou du bromure d’éthidium (pour l’observation à la lumière ultraviolette). Ceux-ci doivent être ajoutés au gel aux concentrations correctes, sinon la visualisation peut être gênée.

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Myélome multiple et électrophorèse de protéines

Le myélome multiple est un néoplasme plasmocytaire multifocal qui affecte la moelle osseuse et est associé à la production d’un sérum et d’une protéine monoclonale urinaire. La cause en est une prolifération progressive et non régulée de plasmocytes qui s’accumulent dans la moelle osseuse. Ces cellules sécrètent un excès d’immunoglobuline (Ig), généralement: 57% d’IgG, 21% d’IgA, 1% d’IgD, IgM, IgE, rarement dans 18% des cas de chaînes légères seules. La prolifération de myélomes multiples interfère avec la production normale de cellules dans la moelle osseuse et entraîne généralement une anémie. Dans certains cas, une leucopénie et une thrombocytopénie sont également observées. Une autre caractéristique est que les cellules de myélome multiple sécrètent certaines substances qui stimulent les ostéoclastes et inhibent les ostéoblastes, ce qui entraîne une destruction exagérée du tissu osseux avec la fracture pathologique ultérieure, dans de nombreux cas, une hypercalcémie.

Bien que le premier cas de myélome multiple ait été diagnostiqué en 1845, cette maladie a longtemps été considérée comme une tumeur osseuse. Ce fait a rendu les enquêtes épidémiologiques difficiles et n’a été considéré dans les dernières décennies que comme une gammapathie monoclonale. Chez les premiers patients étudiés, la présence d’une protéine spéciale appelée protéine de Bence-Jones a été détectée dans les urines.

Quelle est la pathogenèse du myélome multiple?

La pathogenèse comprend une gammapathie monoclonale de signification indéterminée (MGUS) et un MM asymptomatique a été déterminé que les translocations impliquant le locus de la chaîne lourde de l’immunoglobuline sur le chromosome 14q32, initient et maintiennent le clone prolifératif, qui est accompagné de D’autres altérations chromosomiques et des dérégulations de gènes, en particulier les cyclines D1, D2 ou D3, constituent une classification pronostique dans laquelle le profil génétique joue un rôle important.

Quelle est la protéine M?

Comme mentionné précédemment, le myélome multiple se caractérise par la production d’une protéine monoclonale (protéine M). L’électrophorèse des protéines est le test utilisé pour mesurer la quantité de protéines monoclonales dans le sang ou l’urine.

Cette protéine M est synthétisée par les plasmocytes malins sont des molécules d’immunoglobuline ou des parties de celles-ci. La quantité de protéines produite et sécrétée dans le sérum et l’urine reflète l’état du myélome présent dans le corps à un moment donné.

Qu’est-ce que l’électrophorèse des protéines sériques?

L’électrophorèse des protéines est un test de laboratoire basé sur la séparation des protéines par l’application d’un champ électrique. Lorsqu’un échantillon avec un mélange de différentes protéines est soumis à une électrophorèse, les différentes protéines du mélange se séparent en fonction de leur charge électrique.

Le sérum contient une variété de protéines différentes qui seront séparées par électrophorèse en cinq ou six fractions (selon la méthode utilisée par le laboratoire). Ces fractions (également appelées « zones » ou « régions ») sont appelées albumine, alpha 1, alpha 2, bêta (pouvant être séparées en bêta 1 et bêta 2) et gamma. Les immunoglobulines polyclonales (normales) se trouvent dans la zone gamma.

Les immunoglobulines normales présentes dans le sérum sont diverses et présentent de légères différences de structure et de charge électrique. Pour cette raison, soumis à une électrophorèse, ils forment une vaste zone diffuse et symétrique, sans aucune déformation visible.

Les protéines monoclonales sont produites par un clone de plasmocytes, de sorte que toutes les molécules sont identiques et ont la même charge électrique. C’est la raison pour laquelle, dans l’électrophorèse, une protéine monoclonale migre sous forme d’un pic étroit (ce pic apparaît presque toujours dans la zone gamma, mais il peut parfois être présent dans Beta 2 ou Beta 1, voire dans la zone Alpha 2). bien que ce dernier soit rare). L’électrophorèse sérique peut être utilisée pour rechercher une protéine monoclonale, ainsi que pour contrôler la quantité de protéine monoclonale présente.

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