Généralement, les syndromes cliniques résultant d’altérations de l’hémoglobine (Hb) sont connus sous le nom d’hémoglobinopathies et plusieurs tests de laboratoire sont interprétés comme tels, le plus pertinent étant l’électrophorèse d’Hb (EF).
La molécule Hb 1 humaine est formée de 2 paires de chaînes de globine et une molécule d’hème est attachée à chacune d’elles. Physiologiquement, 6 variantes sont formées: Trois variantes embryonnaires transitoires, appelées Hb Gower 1, Hb Gower 2 et Hb Portland, HbF, qui prédomine dans la vie foetale, HbA, qui constitue plus de 95% de l’Hb adulte et HbA2, présente également dans un pourcentage plus faible (1-3,5%) chez les enfants et les adultes.
Il existe de nombreuses variantes d’Hb génétiquement déterminées (héritées) et bien que la plupart soient inoffensives, d’autres provoquent des altérations cliniques remarquables.
Les hémoglobinopathies peuvent être regroupées en 3 catégories fondamentales, les plus pertinentes étant les 2 premières:
– Variants Les variantes structurelles de l’Hb, telles que l’HbS (drépanocytose ou drépanocytose).
– Échec dans la synthèse d’une quantité adéquate d’Hb (thalassémie) normale par défaut dans la production d’une ou plusieurs chaînes de la globine.
– Échec lors du saut normal chez le nouveau-né de produire de l’HbF en HbA (persistance héréditaire de l’Hb chez le fœtus).
L’investigation des patients présentant une suspicion d’hémoglobinopathie doit inclure les antécédents complets avec antécédents familiaux, examen physique et analyses de laboratoire. Ces tests avaient déjà été définis en 1975 par un groupe d’experts du Comité international de normalisation en hématologie: décompte des séries rouges avec indices; L’hémoglobine; hématocrite; frottis de sang périphérique; les réticulocytes; métabolisme du fer; test de solubilité; test de falciformation; quantification de HbA2 et HbF, et EF de Hb à pH alcalin. Si l’Hb détectée est instable ou a une affinité pour l’oxygène altéré, le test de stabilité thermique (par la chaleur) et chimique (isopropanol) doit être ajouté. De cette manière, un diagnostic fiable peut être établi dans la plupart des cas, bien qu’il soit parfois nécessaire de recourir à des techniques plus sophistiquées telles que EF à pH acide, l’étude des globines, la focalisation isoélectrique ou même l’analyse de l’ADN moléculaire.
Electrophorèse dans l’acétate de cellulose à pH alcalin
Ce type de EF est effectué en routine à un pH de 8,4 à 8,6 en utilisant une membrane d’acétate de cellulose comme substrat. Il s’agit d’une méthode simple, rapide et sensible. Détecte les variantes d’Hb les plus courantes et constitue traditionnellement la technique la plus utilisée pour l’évaluation initiale. Au pH alcalin, l’Hb est une protéine chargée négativement qui migre vers l’anode (+) dans un champ électrique. Les variants d’Hb avec des charges différentes à leur surface sont séparés de l’HbA et, par conséquent, tous les détectés sont différents. Hb peut être anormale sans modification de la charge et ne sera donc pas différenciée. Avec cette technique, on obtient une séparation de HbC, S, F, A et J. Lorsqu’une variante est détectée, il est utile de quantifier le pourcentage.
Quelles difficultés d’interprétation peuvent être présentées dans cette analyse ?
– Il peut être difficile de détecter des bandes mineures telles que Hb Constant Spring, HbA2, Hb Bart et HbH.
– Chez le nouveau-né, qui contient de petites quantités d’HbA et d’énormes quantités d’HbF, il peut être difficile de détecter l’HbA. C’est pourquoi vous devez toujours recourir à EF dans de la gélose au citrate lorsque l’HbA n’est pas détectée, ou pour utiliser la focalisation isoélectrique.
– Il n’est pas possible de différencier HbS, D et G. Il n’est pas possible de différencier HbC, E et O. Par conséquent, tous les échantillons dans lesquels une seule bande est détectée en position HbS ou C doivent également être analysés. à la gélose au citrate ou à la focalisation isoélectrique pour exclure la présence d’hétérozygotes composés tels que HbSD, SG, CE ou CO.
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