Cycleurs thermiques PCR: comment ça marche

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La PCR est une procédure simple et largement utilisée dans l’expansion de l’ADN, qui est essentielle dans tout laboratoire, car elle est plus efficace et plus rapide, comme dans le diagnostic de maladies telles que COVID-19, le VIH ou le cancer, permettant un arrêt précoce pour éviter la propagation des infections, et également établir des traitements qui améliorent la qualité de vie des patients.

Cette technique de PCR est largement utilisée dans la recherche scientifique et la biologie moléculaire,la réaction PCR, nécessite la présence de moisissures d’ADN, d’amorces, de nucléotides et d’ADN polymérase,ces composants répondentà certaines caractéristiques et fonctions qui permettent à la machine ou au thermocycleur de produire des cycles répétés d’AMPLIFICATION de AND.

Comment fonctionne le thermocycleur PCR ?

Le dispositif ou l’équipement pour amplifier l’ADN, est un Thermocycler, avec un bloc thermique avec des trous d’eau, dans lequel les tubes à essai sont placés, puis le Thermocycler augmente et abaisse la température du bloc en trois étapes de base déjà programmées par l’utilisateur; la première réaction est chauffée au-dessus du point de dénaturation des deux brins d’ADN complémentaires de l’ADN cible, ce qui provoque la séparation des brins.

Ensuite, la température est abaissée de sorte que les amorces spécifiques se lient aux segments d’ADN cibles, ce processus est appelé hybridation, puis la température est augmentée à nouveau afin que l’ADN polymérase soit capable d’étendre les amorces en ajoutant des nucléotides au brin d’ADN en cours de construction. 

Fonctionnement du Thermocycler

Ce type d’appareil a généralement deux types de façons de fonctionner, le premier est au moyen d’un bloc de résistance électrique, de cette façon la température est distribuée en permanence dans des intervalles de temps réglables, normalement les températures varient entre 4 et 90 ° C; permettant ainsi à l’ADN de perdre ses propriétés naturelles et étant possible la séparation des brins nécessaires à la réalisation de l’analyse.

Puis récemment, une nouvelle modalité appelée technologie Peltier est apparue, cette fois les changements de température sont effectués par une tension électrique, et sa fonction principale est de produire de l’électricité qui se transforme en hautes ou basses températures; dans le Thermocycler, il y a deux semi-conducteurs par joints Peltier qui rendent ce processus possible; il a ses avantages tels que l’efficacité et la précision en ce qui concerne les échantillons et les résultats.

Description de la technique utilisée dans les thermocycleurs PCR

Ces dispositifs effectuent un cycle complet qui augmente ou diminue la température d’un bloc, pour améliorer la transmission de la température les tubes de 0,2-0,5 ml ont la base conique une paroi très mince pour empêcher la condensation à l’intérieur du tube, les thermocycleurs chauffent le capuchon du tube pendant le processus; la PCR se termine par un cycle final d’extension à 72 ° C d’environ 10 minutes pour s’assurer que l’ADN de la chaîne Simple être complété avec le volet complémentaire.

Une fois l’action terminée, le bloc thermocycleur est à 4°c en attendant de recueillir les tubes et de faire passer une aliquote de leur contenu dans un gel d’agarose et ainsi vérifier si le fragment de taille attendu a été amplifié correctement; les résultats d’une PCR dépendent du degré de dégradation de l’ADN d’origine, de l’existence d’inhibiteurs de la réaction et de la similitude des amorces.

  • Précautions d’emploi du thermocycleur PCR.
  • Vous devez porter des vêtements et un écran facial et contrôler l’intensité de l’équipement, qui peut être le maximum avec de l’eau et le minimum si du gel d’agarose est utilisé, il doit y avoir un tableau de référence qui montre les temps de chaque position du potentiomètre et les quantités à utiliser.   

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