Un fluoromètre est un appareil qui permet l’analyse, l’identification et la quantification de substances chimiques contenant des molécules sensibles à la fluorescence, en utilisant la spectrophotométrie ou la fluorométrie en fluorescence.

On peut dire qu’un fluoromètre est un type particulier de dispositif optique couramment utilisé dans les laboratoires, capable de mesurer la qualité de fluorescence d’échantillons biologiques ou minéraux. La fluorescence se produit lorsqu’une substance émet de la lumière visible et semble briller après avoir été exposée à un type de rayonnement, qu’il soit simple ou hautement énergétique, tel que la lumière visible par rayons X. Cette propriété est similaire à la phosphorescence, qui est une émission de lumière à basse température résultant d’une accumulation d’énergie ou du rayonnement d’une substance.

La conception de tout fluoromètre typique comporte plusieurs composants clés. Il possède une source d’entrée pour la lumière visible ordinaire, et cette lumière passe à travers un filtre d’excitation qui ne permet que des longueurs d’onde spécifiques d’impacts dans lesquelles une cellule échantillon du matériau a été étudiée. Lorsque ce matériau, organique ou inorganique, est bombardé par ces longueurs d’onde de lumière contrôlées, il émet une fluorescence, émettant de sa propre lumière caractéristique qui est ensuite passée à travers un filtre d’émission. Les émissions sont lues par un détecteur de lumière qui permet à l’observateur de savoir comment réagit l’échantillon et quel est son contenu.

Bien que la détection du fluoromètre repose sur les principes fondamentaux universels de la fluorescence, il existe plusieurs applications et adaptations uniques pour les dispositifs. L’un des principaux usages des fluoromètres est qu’ils servent à mesurer la fluorescence de la chlorophylle et à étudier ainsi la physiologie des plantes, bien qu’ils puissent actuellement avoir de nombreuses applications.

Qu’est-ce que la fluorescence ?

Fluorescence est un terme qui a été utilisé pour la première fois en 1852 par George Gabriel Stokes. C’est un type particulier de luminescence qui caractérise les substances capables d’absorber de l’énergie sous forme de rayonnement électromagnétique, puis d’émettre une partie de cette énergie sous forme de rayonnement électromagnétique de longueur d’onde différente.

Le mécanisme de fluorescence typique comprend trois étapes séquentielles, appelées respectivement absorption (1), dissipation non radiative (2) et émission (3). Le phénomène de la fluorescence a de nombreuses applications pratiques, parmi lesquelles on peut citer par exemple l’analyse en minéralogie, la gemologie, les capteurs chimiques (spectroscopie fluorescente), les pigments et les encres, les détecteurs biologiques et les lampes fluorescentes.

Sur quoi base la spectrométrie de fluorescence ?

La spectrométrie de fluorescence (également appelée fluorométrie ou spectrofluorimétrie) est un type de spectroscopie électromagnétique qui analyse la fluorescence d’un échantillon. Cela implique l’utilisation d’un faisceau de lumière, généralement de la lumière ultraviolette, qui excite les électrons des molécules de certains composés et les amène à émettre une lumière de moindre énergie, généralement de la lumière visible (mais pas nécessairement). Une technique complémentaire est la spectrométrie d’absorption. Les appareils qui mesurent la fluorescence sont appelés fluoromètres ou fluoromètres. La spectrométrie de fluorescence est utilisée dans les analyses biochimiques, médicales, chimiques et de recherche de composés organiques.

Quelle est l’application la plus récente des fluoromètres ?

Actuellement, l’une des applications les plus modernes de la fluorométrie est la quantification des acides nucléiques, au moyen de fluoromètres, qui mesurent les concentrations d’ADN, d’ARN et de protéines avec une précision et une sensibilité élevées. Il est basé sur l’utilisation de fluorophores qui sont dispersés spécifiquement entre les molécules d’intérêt, minimisant ainsi les effets des contaminants. La précision des mesures, même à de faibles concentrations (plage efficace de 5 ng à 1 µg), fait de cet équipement un outil idéal pour des applications telles que la PCR en temps réel et le séquençage massif.

Dans Kalstein, nous présentons le modèle de fluoromètre YR412-A. Il s’agit d’un fluoromètre à double canal permettant une détection par fluorescence de haute sensibilité afin de quantifier les acides nucléiques et les protéines. C’est pourquoi nous vous invitons à consulter ICI