Le thermocycleur est un appareil qui permet la réaction en chaîne par polymérase (PCR) de manière efficace et rapide ; au moyen de la réalisation automatique et cyclique des changements de température nécessaires à l’amplification d’une chaîne d’acide désoxyribonucléique (ADN) ; à partir d’une enzyme thermostable.

Les thermocycleurs sont utilisés pour des amplifications qualitatives ou pour quantifier la quantité d’ADN amplifié. Les résultats de ces techniques d’amplification d’ADN ont un grand impact sur notre société ; surtout en cette période de pandémie où ils sont devenus l’un des principaux tests de diagnostic, c’est pourquoi il faut s’assurer que les thermocycleurs sont précis ; précis et cohérents, afin d’obtenir des résultats fiables.

Qu’est-ce que la réaction en chaîne par polymérase ou PCR ?

La réaction en chaîne par polymérase, appelée PCR en abrégé par son acronyme en anglais (polymerase chain reaction), est une technique qui permet l’amplification exponentielle d’un fragment d’ADN d’intérêt. C’est-à-dire qu’à partir d’un faible nombre de copies de ce fragment, après la réaction PCR, on obtient des millions de copies qui sont déjà facilement détectables en laboratoire. La PCR a été inventée par Kary Mullis en 1986 et lui a valu le prix Nobel en 1993.

Qu’est-ce que la PCR en temps réel ?

La PCR en temps réel est une modalité de PCR en point final, où l’accumulation d’ADN amplifié est détectée et quantifiée au fur et à mesure de l’avancement de la réaction, c’est-à-dire : « En temps réel » cela est réalisé en incorporant une molécule fluorescente qui est associée à l’ADN amplifié, où l’augmentation de cette fluorescence est proportionnelle à l’augmentation de la quantité de molécules d’ADN amplifiées dans la réaction.

Les protocoles de PCR en temps réel peuvent être conçus pour obtenir des résultats quantitatifs ainsi que démontrer la présence ou l’absence d’un fragment d’ADN ou d’ARN ou des résultats quantitatifs en calculant le nombre de copies d’ADN qui, comparé à une courbe standard, établit la quantité de micro-organismes présent dans un échantillon donné ou pour déterminer le nombre de molécules d’un ARN pour désigner son expression, par exemple.

La PCR en temps réel est une technique qui combine amplification et détection en une seule étape, en corrélant le produit PCR de chacun des cycles avec un signal d’intensité de fluorescence. Ils sont composés d’un thermocycleur couplé à un système optique, qui surveille le signal des fluorophores utilisés pour détecter le produit amplifié. Comme la fluorescence de ceux-ci augmente à mesure que le produit est amplifié, les processus d’amplification et de détection sont combinés en une seule étape.

Cette technique présente des caractéristiques importantes telles qu’une spécificité élevée, une large plage de détection et une vitesse de visualisation du produit. Les systèmes de PCR en temps réel comprennent un thermocycleur et une unité capable de détecter des signaux fluorescents pour surveiller la progression de la réaction d’amplification, ainsi qu’un logiciel pour l’analyse des données. Les fluorophores utilisés pour surveiller l’amplification d’ADN pendant la PCR en temps réel peuvent être des sondes d’affinité d’ADN (SYBR Green) ou des sondes spécifiques de fragments d’ADN (sondes Taqman).

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