Un spectrophotomètre est un instrument largement utilisé dans les laboratoires pour mesurer l’absorbance d’un échantillon, en fonction de la longueur d’onde d’un rayonnement électromagnétique, et ainsi connaître la concentration des substances dans une solution.
L’importance d’un spectrophotomètre réside dans le fait qu’il est utilisé en laboratoire dans le but principal de diagnostiquer, en tenant compte des propriétés de la lumière et de l’interaction avec d’autres substances. En général, cet équipement se compose de 4 parties principales : une source, un monochromateur, un diviseur de faisceau, une zone d’échantillon et un détecteur. Il possède également des éléments optiques tels que des lentilles ou des miroirs, qui transmettent la lumière tout au long de l’équipement.
La spectroscopie est une technique analytique qui mesure la quantité de longueurs d’onde discrètes de lumière UV ou visible absorbée ou transmise par un échantillon par rapport à un échantillon de référence ou à blanc. Cette propriété est influencée par la composition de l’échantillon, fournissant potentiellement des informations sur ce qui se trouve dans l’échantillon et à quelle concentration.
Comment fonctionne un spectrophotomètre ?
Il existe plusieurs types de spectrophotomètres. Ceux-ci sont classés en fonction du type d’échantillon analysé ; il s’agit des échantillons d’absorption atomique et d’absorption moléculaire (spectrophotomètre UV-VIS). Un spectrophotomètre UV-VIS est basé sur le processus d’absorption du rayonnement ultraviolet-visible (rayonnement d’une longueur d’onde comprise entre 200 et 780 nm) par une molécule. L’absorption de ce rayonnement provoque la promotion d’un électron à un état excité. Les électrons qui sont excités en absorbant le rayonnement de cette fréquence sont les électrons de liaison des molécules, de sorte que les pics d’absorption peuvent être corrélés aux différents types de liaison présents dans le composé. Par conséquent, la spectroscopie UV-VIS est utilisée pour identifier les groupes fonctionnels présents dans une molécule. Les bandes qui apparaissent dans un spectre UV-VIS sont larges en raison de la superposition de transitions vibrationnelles et électroniques.
La lumière a une certaine quantité d’énergie qui est inversement proportionnelle à sa longueur d’onde. Par conséquent, les longueurs d’onde plus courtes de la lumière transportent plus d’énergie et les longueurs d’onde plus longues transportent moins d’énergie
Applications d’un spectrophotomètre
Les spectrophotomètres sont utilisés dans de nombreux laboratoires dans différents domaines de la science, allant de l’analyse d’une culture bactérienne, l’identification de médicaments et les tests et la quantification de la pureté de l’acide nucléique, au contrôle de qualité dans l’industrie des boissons et à la recherche chimique.
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