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Comment fonctionne un thermalware ?

Une cellule thermique est un Molecular Biology Laboratory Equipment, utilisé dans l’amplification de molécules d’ ADN par la technique de PCR (amplification en chaîne par polymerase), car il est capable d’effectuer des cycles de température nécessaires pour l’ amplification des brins d’ADN.

Le processus de la PCR est automatique et il peut être complété en quelques heures. Ce processus est entièrement dirigé par le thermocycleur, qui est programmé pour changer la température de réaction toutes les quelques minutes qui font la dénaturation et la synthèse de l’ADN.

La cellule thermique est différente si un dernier point PCR ou une PCR en temps réel est effectuée, étant donné que ce dernier doit détecter la fluorescence et dans différents canaux d’absorption.

Le modèle le plus commun de thermocycleur est constitué d’un bloc de résistance électrique qui distribue par l’intermédiaire d’une plaque à une température homogène (entre 4 ° C et 96 ° C) pendant un temps programmable. Dans certaines équipes, la résistance électrique a été remplacé par la technologie Peltier (semi-conducteur), ce qui permet une plus grande homogénéité de la température.

Marches à l’intérieur d’une cellule thermique

Une cellule thermique fonctionne à travers trois étapes importantes au cours de la technique PCR. La première étape est la dénaturation, qui se produit dans le premier cycle. De là, une partie des cycles suivants pour séparer les brins formés. Bien que cela se produit, les plages de température entre 94 et 98 º C. Ce processus dure au moins 10 secondes.

La seconde étape consiste en l’alignement des premières dans le filetage du moule que vous souhaitez amplifier. Le passage dure environ 20 secondes et sa température peut devenir variable. Cela arrive parce que cela dépend plus que tous les premiers utilisés dans cette opération. Les premières sont de petites séquences de 20 nucléotides dans lesquels des tests avec des sucres simples sont utilisés. À de nombreuses reprises, le glucose est partie, la température utilisée pour ce type d’essais est compris entre 55 et 65 ° C, bien que certains peuvent atteindre jusqu’à 72 º C. Ceci est la température appropriée pour travailler avec Taq polymérase.

La troisième étape est l’allongement de la double brin de 20 paires qui a été créé à l’étape précédente. temps Allongement ne devrait pas être plus d’une minute par kilobase. Cela signifie que il y a un millier de bases du gène que vous souhaitez amplifier. Il est recommandé pour de courtes séquences sur un maximum de 4 Ko.

Après cette étape, il est très probable qu’il devienne le premier de 98 ° C pendant environ 10 secondes, puis répéter le cycle entre 30 et 45 fois plus. Après ces 3 étapes, une plus de chaleur est ajouté, au moins environ 72 degrés pendant au moins 7 minutes. Cela est nécessaire pour être en mesure de décourager les brins de l’ADN polymérase et première. Après cela, il est passé à une étape de froid qui passe entre une température de 15 et 4 ° C pour maintenir l’échantillon en parfait état jusqu’au moment où il est demandé.

Nettoyage et entretien d’une cellule thermique

Pour maintenir la thermocylator dans des conditions de travail optimales, après l’avoir débranché du courant électrique et vérifiez qu’il est pas chaud, vous devez effectuer les opérations de nettoyage suivantes:

  • Nettoyer le boîtier ou d’une partie externe avec un chiffon doux, légèrement humide dans une solution de savon de pH neutre (ne pas utiliser des cires ou des abrasifs).
  • nettoyer les puits de la plaque avec des tampons de coton humidifié dans de l’isopropanol ou du méthanol. La zone thermique du couvercle doit également être nettoyé avec un chiffon doux ou du papier imbibé d’isopropanol. Si les puits du bloc thermique sont très sales, il faut utiliser des bateaux imprégné d’une solution d’hypochlorite de sodium à 1%, puis terminer le nettoyage avec 95% d’éthanol. Les puits ne doivent jamais être humide.
  • Nettoyez le système de ventilation. Il est très important qu’il ne soit pas obstrué par des particules adhérées, pour lesquelles vous ne devriez pas avoir un autre équipement générant de la chaleur ou a besoin d’air dans un rayon de 30 cm.

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