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Méthodes électrophorétiques

L’électrophorèse est une méthode analytique dans laquelle un courant électrique contrôlé est utilisé afin de séparer les biomolécules en fonction de leur rapport de taille à la charge électrique, en utilisant une matrice gélatineuse comme base. Lorsqu’un mélange de molécules de charge ionisée et nette est positionné dans un champ électrique, elles subissent une force d’attraction vers le pôle ayant une charge opposée, permettant aux molécules chargées positivement de passer à la cathode (pôle négatif). chargé positivement se déplacera vers l’anode (pôle positif).

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Le support sur lequel se déroule le déplacement de l’espèce est un gel de Polyacrylamide, ce type d’analyse est caractérisé par:

1. La migration est proportionnelle à la charge nette, à la taille et à la forme de la protéine.

2. Les gels sont chimiquement inertes, transparents et stables dans une large gamme de pH, de température et de force ionique.

3. Des gels de polyacrylamide (PAGE) sont formés par la polymérisation d’acrylamide par l’action d’un agent de réticulation, le bis-acrylamide, en présence d’un initiateur (TEMED (N, N, N, N’-tétraméthylnediamine)) et comme catalyseur. l’ion persulfate (S2O8-), qui est ajouté sous forme de persulfate d’ammonium.

En fonction de l’état des protéines (natives ou dénaturantes) au cours du processus électrophorétique, celles-ci sont classées en électrophorèse native ou dénaturante:

Dans une électrophorèse dénaturante, c’est celle qui soumet les protéines à la migration en assurant une dénaturation complète (perte de la structure tridimensionnelle). Dans cette situation, la migration est proportionnelle à la charge et à la taille de la molécule mais pas à sa forme.

Dans une électrophorèse native, les protéines sont soumises à une migration sans dénaturation. Dans cette situation, les protéines migrent en fonction de leur charge, de leur taille et de leur forme. De plus, les interactions entre sous-unités et entre protéines sont maintenues dans certains cas, en séparant les complexes.

IEF-PAGE

L’utilisation de l’électrophorèse par IEF-PAGE est limitée aux molécules pouvant être chargées positivement ou négativement. Les protéines, les enzymes et les peptides sont des molécules amphotères. La charge nette d’une protéine est la somme de toutes les charges positives et négatives de la chaîne latérale des acides aminés, mais la configuration de la protéine joue également un rôle. Pour les protéines telles que les glycoprotéines ou les glycoprotéines, la charge nette est également influencée par le sucre ou par le groupe fonctionnel de l’acide nucléique. La dégradation de la phosphorylation a également une influence sur la charge nette.

La focalisation isoélectrique est l’une des meilleures procédures pour l’isolation de protéines.

L’analyse par électrophorèse avec SDS est un type d’électrophorèse naturelle dans laquelle les échantillons sont dénaturés à la chaleur en présence d’agents dénaturants (le bêta-mercaptoéthanol, qui détruit les ponts disulfures, le SDS dénature et enrobe la protéine), et ils se séparent en chaînes polypeptidiques isolées. Le SDS est un détergent dénaturant qui lie les chaînes de polypeptides dénaturées avec un rapport de 1,4 g de SDS par gramme de protéine, une liaison de molécule de SDS pour deux acides aminés de la chaîne. Cette union massive de molécules SDS bloque la charge de la molécule elle-même

et donne au complexe une charge nette négative proportionnelle à sa masse, faisant en sorte que toutes les protéines complexées avec le SDS se rendent à l’anode. 

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Analyse d’ADN

L’électrophorèse est un moyen d’analyser l’ADN, ou acide désoxyribonucléique, code qui contient toutes les caractéristiques de l’héritage. L’ADN est organisé en séquences, par exemple, une séquence représente la couleur des yeux et une autre séquence représente la couleur de la peau. Par électrophorèse, des séquences d’ADN spécifiques peuvent être analysées, isolées et clonées. L’ADN analysé peut être utilisé dans les enquêtes judiciaires et les tests de paternité.

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