Para comprender que es un Biofotómetro y cómo funcionan estos equipos es necesario que conocer el concepto de espectrofotometría. Esta disciplina es un método científico utilizado para medir cuánta luz absorbe una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa a través de la solución muestra, basándose en la Ley de Beer-Lambert. La medición también puede usarse para medir la cantidad de un producto químico conocido en una sustancia.

En la espectrofotometría se aprovecha la absorción de radiación electromagnética en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la radiación incidente en este espectro y promueve la transición del analito hacia un estado excitado, transmitiendo un haz de menor energía radiante. En esta técnica se mide la cantidad de luz absorbida como función de la longitud de onda utilizada. La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica de cada sustancia química.

La espectrofotometría ultravioleta-visible utiliza haces de radiación del espectro electromagnético, en el rango UV de 180 a 380 nm, y en el de la luz visible de 380 a 780 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro. Se puede decir entonces que la espectrofotometría es la técnica espectroscópica para tasar la concentración o la cantidad de especies determinadas. En estos casos, el instrumento que realiza tales medidas es un Espectrófotometro, estos equipos hicieron su aparición alrededor del año 1940, pero los primeros modelos no podían trabajar en el ultravioleta, hasta que  Arnold O. Beckman desarrolló una versión mejorada.

¿Qué es un biofotómetro?

Un Biofotometro es un micro-espectrofotómetro, esto lo vuelve un instrumento sofisticado y adecuado para evaluar la calidad de muestras de ácidos nucleicos (DNA, RNA) y proteínas. Indispensable en laboratorios de biología molecular. 

¿Cuál es la importancia de su uso?

La purificación con ácido nucleico es una de las aplicaciones más importantes en los laboratorios moleculares. La pureza y homogeneidad de la muestra son consideraciones importantes para aplicaciones posteriores. En la práctica, los ácidos nucleicos se purifican con la ayuda de kits disponibles en el mercado, que permiten la separación de la mayoría de los componentes celulares. Sin embargo, puede que la presencia de proteínas u otros componentes orgánicos en el eluido no se elimine por completo. Al purificar el ácido nucleico sin un kit, los productos químicos utilizados en el proceso, p.ej., fenol o etanol de una extracción de fenol/cloroformo, plantean riesgos de contaminación adicionales. Para asegurar una contaminación mínima de la muestra, es esencial verificar su pureza con mediciones fotométricas. Las relaciones de los valores de absorbancia en las longitudes de onda 230 nm, 260 nm y 280 nm (260 nm/230 nm y 260 nm/280 nm) ofrecen una imagen clara de la pureza de una muestra de ácido nucleico.

En general, la pureza de una solución de ADN se puede definir fácilmente mediante el uso de relaciones de pureza. Es posible que una pureza reducida le sea atribuida al hecho de que la muestra es solubilizada en agua en lugar de en una solución tampón. Como el agua y la solución tampón tienen diferentes propiedades, la absorbancia de la muestra que está siendo medida se verá afectada por esta disparidad. Por esta razón, algunos biofotómetros son capaces de grabar un “Escaneo de pureza” que visualiza gráficamente las propiedades de absorbancia de una muestra y, por tanto, permiten un control de calidad visual rápido y simple. Además, todos los datos brutos importantes pertenecientes a la muestra de ADN son visualizados en formato de tabla. La tabla muestra opcionalmente las relaciones de pureza (A260/A230 y A260/A280), los valores de absorbancia (datos brutos), así como la absorbancia de fondo, por ejemplo a 320 nm. Por lo tanto, los dos formatos de visualización se complementan perfectamente para permitir una evaluación de la calidad de la muestra de ADN.

Pensando en la importancia que tiene el obtener un resultado sumamente preciso al evaluar la calidad de muestras de ácidos nucleicos y proteínas. En Kalstein ponemos a su disposición un sofisticado biofotómetro que le permitirán obtener resultados de gran calidad. Por eso le invitamos a echar un vistazo AQUI