Le thermocycleur ou séquenceur thermique est un dispositif qui permet une réaction en chaîne de la polymérase (PCR) de manière efficace et rapide, en réalisant automatiquement et cycliquement les changements de température nécessaires pour l’amplification d’une chaîne d’acide désoxyribonucléique ( ADN), d’une enzyme thermostable.

Les thermocycleurs sont utilisés pour des amplifications qualitatives ou pour quantifier la quantité d’ADN amplifié. Les résultats de ces techniques d’amplification ont un impact considérable sur notre société. Il est donc important de veiller à ce que les thermo-clamps soient précis, précis et uniformes, afin d’obtenir des résultats fiables.

Le développement de l’idée pour la mettre en pratique a été l’œuvre d’un biochimiste californien et surfeur nommé Kary Mullis en 1983. Cette méthodologie est couramment utilisée dans les laboratoires de recherche médicale et biologique, avec une grande variété d’applications, notamment: la détection de l’expression des gènes et des maladies héréditaires, l’identification des traces génétiques, le clonage de gènes, les tests de paternité, le calcul ADN et le diagnostic des maladies infectieuses.

Qu’est-ce qu’un PCR ?

La PCR permet à un petit nombre de molécules d’ADN d’être amplifiées de manière exponentielle plusieurs fois. Cette méthodologie est couramment utilisée dans les laboratoires de recherche médicale et biologique, avec une grande variété d’applications, notamment la détection de l’expression des gènes et des maladies héréditaires, l’identification des empreintes génétiques, le clonage de gènes, les tests de paternité. , ADN et diagnostic des maladies infectieuses.

En quoi consiste cette équipe ?

Le modèle le plus courant consiste en un bloc de résistance électrique qui distribue une température homogène à travers une plaque pendant des durées pouvant être programmées, généralement entre 4 ° C et 96 ° C, où dénaturation, hybridation et extension de Une molécule d’ADN.

Que se passe-t-il à l’intérieur du thermocycleur ?

Ce qui se passe à l’intérieur du thermocycleur est divisé en étapes. Ce sont les suivantes :

La première étape est la dénaturation, qui se produit au cours du premier cycle. À partir de là, passez aux cycles suivants pour séparer les brins formés. Bien que cela se produise, la température varie entre 94 et 98 ºC. Ce processus prend au moins environ 10 secondes.

La deuxième étape consiste à aligner les amorces dans le filetage du moule à amplifier. Le passage dure environ 20 secondes et sa température peut devenir variable. Cela est dû au fait que cela dépend principalement des amorces utilisées dans cette opération. Les amorces sont de petites séquences de 20 nucléotides dans lesquelles des tests avec des sucres simples sont utilisés. Dans de nombreux cas, le glucose en fait partie. La température utilisée pour ce type de tests varie entre 55 et 65 ºC, bien que certains puissent atteindre 72 ºC. Il s’agit de la température appropriée pour travailler avec la polymérase Taq.

La troisième étape est l’allongement du double brin de 20 paires créé à l’étape précédente. La durée d’élongation ne devrait pas dépasser une minute par kilobase. Cela signifie qu’elles représentent environ mille bases du gène que vous souhaitez amplifier. Il est recommandé pour les séquences courtes d’environ 4 Ko maximum.

Après cette étape, il est très probable que vous reveniez à la première température de 98 ° C pendant environ 10 secondes, puis que le cycle soit répété entre 30 et 45 fois plus. Après ces 3 étapes, une autre étape de chauffage est ajoutée, d’au moins 72 ° C pendant au moins 7 minutes. Cela est nécessaire pour pouvoir décourager les brins d’ADN provenant des amorces et de la polymérase. Après cela, un passage à froid se situant entre 15 et 4 º C est nécessaire pour maintenir l’échantillon en parfait état jusqu’au moment où il est demandé.

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