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Thermocycleurs en temps réel

Un thermocycleur en temps réel est un équipement de laboratoire qui permet de réaliser efficacement et rapidement la réaction en chaîne par polymérase (qPCR) en temps réel ; au moyen de la réalisation automatique et cyclique des changements de température nécessaires à l’amplification d’une chaîne d’acide désoxyribonucléique (ADN) ; à partir d’une enzyme thermostable. L’objectif de ce type de PCR est de détecter et de quantifier les séquences d’acides nucléiques spécifiques au moyen de molécules fluorescentes dans la réaction, où l’augmentation de la fluorescence est proportionnelle à l’augmentation de la quantité de molécules d’ADN amplifiées dans la réaction.

Ce thermocycleur dispose d’un système optique couplé moderne, qui surveille le signal des fluorophores utilisés pour détecter le produit amplifié. Comme la fluorescence de ceux-ci augmente à mesure que le produit est amplifié, les processus d’amplification et de détection sont combinés en une seule étape.

Pcr en temps réel

Le principe de la qPCR est basé sur la PCR endpoint, seule la manière dont les produits d’amplification sont détectés et analysés est différente. Le terme réel fait référence au fait que la détection des produits amplifiés se produit à chaque cycle de la réaction. Et le terme quantitatif fait référence au fait qu’il est possible de quantifier la quantité d’échantillon.

Cette technique présente des caractéristiques importantes telles qu’une spécificité élevée, une large plage de détection et une rapidité de visualisation du produit. Les systèmes de PCR en temps réel comprennent un thermocycleur et une unité capable de détecter des signaux fluorescents pour surveiller la progression de la réaction d’amplification, ainsi qu’un logiciel pour l’analyse des données. Les fluorophores utilisés pour surveiller l’amplification d’ADN pendant la PCR en temps réel peuvent être des sondes d’affinité d’ADN (SYBR Green) ou des sondes spécifiques de fragments d’ADN (sondes Taqman).

Types de thermocycleurs en temps réel

Il existe différents types de thermocycleurs en temps réel sur le marché, dont les principales différences sont la source d’énergie qu’ils utilisent pour l’excitation. Il existe généralement trois types de sources : les ampoules, les diodes électroluminescentes (DEL) et les lasers. Quelle que soit la molécule fluorescente ou reporter utilisée, elle est d’abord excitée et son signal d’émission collecté à travers un filtre qui permet le passage de la longueur d’onde correspondante qui atteint un photodétecteur qui capte les informations de l’échantillon pour analyse dans un logiciel informatique.

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