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Comment calibrer un thermocycleur?

Le calibrage des thermocycleurs est un processus important pour en prendre soin. C’est pourquoi tous les points de vue doivent être clairs pour en calibrer un. Parmi ceux-ci, il y a les points de vue de la biologie moléculaire, qui se concentrent sur la copie d’une réaction de PCR au regard des métrologues.

C’est pourquoi l’étalonnage doit être effectué par un personnel qualifié, c’est-à-dire qu’aucune personne ordinaire ne peut l’essayer. Rappelez-vous que des années d’étude sont effectuées pour cela. Les vues doivent également être réalisées dans des conditions environnementales définies qui permettent le processus, ainsi que les circonstances.

Calibrage par imitation du procédé PCR

Si nous prenons cela du point de vue d’un biologiste moléculaire, c’est la meilleure façon de calibrer un thermocycleur, à condition que ce soit le processus qui imite le processus de PCR. Le processus correct consiste à placer les tuvos dans des puits en blocs, à remplir le mélange réactionnel et à placer les capteurs. Ensuite, fermez les tubes et les thermocycleurs avec la couverture thermique afin de développer le protocole de PCR utilisé en laboratoire.

Tout ce processus doit être sous une température réelle dans un tube rempli d’un mélange réactionnel particulier. Tout cela doit se produire pendant le protocole de PCR réalisé à partir d’un instrument particulier.

Chaque combinaison a eu ou jusqu’à ce que le protocole et l’instrument d’étalonnage soient répétés. Cela alourdit considérablement la charge de travail. C’est pourquoi les résultats ne peuvent même pas être comparés entre eux. Pas même à aucune sorte de norme ou de spécification établie par le fabricant.

Gardez à l’esprit que cette méthode de calibration collecterait littéralement de nombreuses variables incontrôlables. Par conséquent, l’ajout d’une grande composante d’incertitude est le meilleur moyen de mettre fin aux incertitudes comprises entre 2 ° C et plus. Or, lorsque l’incertitude est d’environ 2 ° C et que, parallèlement, la mesure est de 96 ° C, il arrive que la température du thermocycleur puisse se situer dans une plage allant de 94 ° C à 98 ° C.

Il faut également garder à l’esprit que la différence de température pourrait avoir des répercussions sur l’inactivation de la Taq polymérase. Par conséquent, le niveau d’incertitude n’est pas du tout agréable lors de l’étalonnage du thermocycleur. Cependant, si le processus de PCR est copié, cela peut sembler une option tentante.

Étalonnage représentatif du processus

D’un point de vue, le meilleur moyen de calibrer un ustensile tel qu’un thermocycleur consiste à effectuer une mesure représentative et standard du processus de PCR. La méthode permet l’étalonnage de toutes les PCR standard. La dynamique et sa partie statique doivent être prises en compte lors du processus de PCR. Ceci est important car il y a des problèmes qui ne peuvent pas être connus à l’œil nu, ou plutôt avec le contrôle statique d’une PCR.

Les températures proches de la dénaturation, de l’élongation et de l’hybridation doivent être évaluées une par une. Les effets qu’ils peuvent avoir peuvent varier en fonction de la température.

Calibrage selon les normes internationales

Si vous travaillez dans le domaine de la météorologie, ce pourrait être la zone idéale pour calibrer un thermocycleur. En ce qui concerne le météorologue, un étalonnage est défini comme une opération nécessaire dans certaines conditions spécifiques.

Au cours de ce processus, la traçabilité est garantie par l’utilisation d’étalons de référence et l’expression de valeurs responsables de l’étalonnage en unités SI. Cependant, également à cause de cette incertitude calculée à partir du résultat de l’étalonnage. En plus du fait que les mêmes étalonnages ne sont effectués que par des ingénieurs spécialisés dans l’étalonnage, qui sont littéralement compétents et qualifiés pour effectuer une telle action.

Comment savoir si un étalonnage est complètement sûr

• L’étalonnage doit être mesuré avec des caractéristiques thermiques incluant un résultat de PCR. Parmi eux, la précision, l’excès ou la portée, la vitesse de chauffage, le temps de rétention et l’uniformité.

• Un processus dynamique doit être exécuté à la place d’un processus statique.

• Il est essentiel d’exécuter via plusieurs canaux pour exclure les effets de temps entre les puits.

• Il est très important d’avoir des conditions environnementales contrôlées.

• Le personnel autorisé doit avoir l’expérience nécessaire pour mener à bien ces actions.

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